本發明公開了一種群勃龍殘留快速檢測試紙卡及其制備方法。本發明的技術方案要點為：一種群勃龍殘留快速檢測試紙卡，包括塑料盒體和封裝于塑料盒體內的試紙條，所述試紙條的底層為支撐層，該支撐層上由左到右依次附著有緊密相連的樣品墊、金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述的硝酸纖維素膜上有群勃龍-雞卵清白蛋白偶聯物溶液印制的檢測線和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線，所述的金標抗體結合墊上灌注有膠體金標記的抗群勃龍特異性單克隆抗體。本發明還公開了該群勃龍殘留快速檢測試紙卡的制備方法。本發明操作簡單、快速準確、靈敏度高、特異性強、成本低、穩定性好，可進行批量檢測。

1.一種群勃龍殘留快速檢測試紙卡，其特征在于：所述的群勃龍殘留快速檢測試紙卡
包括塑料盒體和封裝于塑料盒體內的試紙條，所述試紙條的底層為支撐層，該支撐層上由
左到右依次附著有緊密相連的樣品墊、金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述的塑
料盒體上開有加樣孔和觀察窗，該加樣孔的位置與試紙條上的樣品墊位置相對應，觀察窗
與試紙條上的硝酸纖維素膜位置相對應，所述的硝酸纖維素膜上有群勃龍－雞卵清白蛋白
偶聯物溶液印制的檢測線和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線，所述群勃龍-雞卵清白蛋白偶聯
物的制備方法為：混合酸酐法將37.2mgTRE琥珀酸酯溶解在2mlN,N-二甲基甲酰胺
（DMF）中，置4℃冰箱中預冷10min，然后于冰浴磁力攪拌下，加入10μl三乙胺，4℃冰浴條
件下反應1h，然后加入30μl氯甲酸異丁酯，繼續冰浴攪拌反應1h，將40mg的OVA溶于2
mlpH9.6濃度為0.05mol/L的碳酸鹽緩沖溶液，冰浴、攪拌下將上述反應產物逐滴加入
OVA溶液中，加完后在4℃下振蕩反應6h，反應產物充分透析，即得TRE-OVA包被抗原溶液，
將其冷凍干燥保存備用，所述的金標抗體結合墊上灌注有膠體金標記的抗群勃龍特異性單
克隆抗體，該金標抗體結合墊的制備方法為：將玻璃纖維棉裁成4mm寬的細條，放入含有質
量濃度為5%的BSA、質量濃度為2%的蔗糖、質量濃度為0.8%的NaCl和質量濃度為0.05%的
NaN₃的磷酸鹽緩沖液中20min，37℃恒溫烘干，然后將膠體金標記的抗群勃龍特異性單克隆
抗體灌注到已處理好的玻璃纖維棉上，真空凍干4h，即制得金標抗體結合墊，其中膠體金標
記的抗群勃龍特異性單克隆抗體是由群勃龍-牛血清白蛋白偶聯物免疫Balb/C小鼠制備而
來的，所述的群勃龍-牛血清白蛋白偶聯物TRE-BSA的制備過程具體包括以下步驟：
（1）半抗原衍生化：稱取TRE100mg溶于10ml無水吡啶，然后加入180mg的琥珀酸酐，50
℃避光攪拌反應24h，反應產物用氮吹儀濃縮，獲得淡黃色膏狀物，用質量濃度為5%的
NaHCO₃溶液溶解后，乙醚萃取，H₂SO₄酸化，離心后棄上清，殘余物用無水硫酸鈉干燥，重結晶
得TRE琥珀酸酯；
（2）免疫原的合成：采用碳化二亞胺EDC法合成TRE免疫原，首先將37.2mgTRE琥珀酸酯
用2mlN,N–二甲基甲酰胺攪拌溶解后，加入12mgN-羥基琥珀酰亞胺NHS和38mgEDC，37℃
條件下避光，搖床振蕩反應24h，離心后取上清液逐滴加入到3ml含66mgBSA、摩爾濃度為
0.01mol/L、pH=7.4的磷酸鹽緩沖溶液PBS中，37℃條件下避光振蕩反應4h，反應完成后先用
蒸餾水透析2d，再用PBS透析3d，紫外掃描透析液無小分子吸收峰時分裝于安瓿瓶中，-20℃
保存。
2.根據權利要求1所述的群勃龍殘留快速檢測試紙卡，其特征在于所述樣品墊的制備
方法為：將玻璃纖維棉用含有質量濃度為2%的BSA、質量濃度為1%的蔗糖、質量濃度為0.5%
的硼酸鈉和質量濃度為0.1%的NaN₃的PBS緩沖液處理后，干燥備用，即為樣品墊。
3.根據權利要求1所述的群勃龍殘留快速檢測試紙卡，其特征在于所述硝酸纖維素膜
的制備方法為：將硝酸纖維素膜置于X-only單向噴點儀平臺上，包被抗原群勃龍-雞卵清白
蛋白偶聯物放于A池，羊抗鼠IgG放于B池，展平壓緊，開機后將包被抗原和二抗分別點射于
硝酸纖維素膜上，形成檢測線和質控線，室溫自然干燥后，將其浸入封閉液中30min，所述封
閉液為BSA質量濃度為1%、pH值為7.4的PBS緩沖液，37℃烘干后，加入干燥劑，4℃密封保存。
4.根據權利要求1所述的群勃龍殘留快速檢測試紙卡，其特征在于所述吸收墊的制備
方法為：將以植物長纖維為原材料制作的純白濾紙用切割機切成4mm寬的細條，并用膠膜進
行一側封閉，干燥備用，即為吸收墊。