本文公開了用于鑒定生物樣品、特別是獸醫(yī)來源的樣品中病毒特有的多核苷酸序列的方法和組合物。還公開了可用于檢測(cè)一種或多種病毒來源的哺乳動(dòng)物病原體的一種或多種特定的種、毒株、類型或亞型的存在情況的寡核苷酸引物對(duì)和標(biāo)記的寡核苷酸檢測(cè)探針，以及包含病毒特異性引物和標(biāo)記的檢測(cè)探針的系統(tǒng)、診斷試劑盒和制造品，包括可用于鑒定多價(jià)疫苗的病毒成分和定量測(cè)定包括家畜疫苗的特定減毒活病毒的效價(jià)的系統(tǒng)、診斷試劑盒和制造品。在某些實(shí)施方案中，實(shí)時(shí)定量PCR方法已被用來鑒定和區(qū)分多價(jià)牛科動(dòng)物船運(yùn)熱疫苗中牛病毒性腹瀉病毒的3種已知遺傳亞型(BVDV-1a、BVDV-1b和BVDV-2)。

1.一種適用于檢測(cè)多個(gè)減毒活病毒顆粒內(nèi)如若存在的BVDV-1b病毒特異性核酸的組合
物，所述組合物包含：
(a)第一病毒特異性寡核苷酸擴(kuò)增引物，其由SEQIDNO:1的核苷酸序列組成；
(b)第二病毒特異性寡核苷酸擴(kuò)增引物，其由SEQIDNO:2組成的核苷酸序列組成；和
(c)至少第一標(biāo)記的病毒特異性檢測(cè)探針，其由標(biāo)記的核苷酸序列組成，所述核苷酸
序列由SEQIDNO:3組成；其中所述組合物適用于使用定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)檢
測(cè)病毒特異性核酸。
2.一種用于檢測(cè)樣品中多核苷酸群中BVDV-1b病毒特異性多核苷酸的存在情況的方
法，所述方法包括：
在(i)含有其中多個(gè)減毒活病毒顆粒能夠復(fù)制的培養(yǎng)的牛細(xì)胞的測(cè)定板和(ii)相應(yīng)的
沒有細(xì)胞的參比板中稀釋疑似含有所述減毒活病毒顆粒的樣品；
使來自樣品的核酸與權(quán)利要求1的組合物接觸；并且
如果BVDV-1b-特異性核酸分子存在于樣品中則進(jìn)行定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)
以產(chǎn)生病毒特異性擴(kuò)增產(chǎn)物；
其中所述多個(gè)減毒活病毒顆粒包含在哺乳動(dòng)物疫苗中。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述哺乳動(dòng)物疫苗是牛BRDC或船運(yùn)熱疫苗。
4.權(quán)利要求2的方法，其中所述多個(gè)減毒活病毒顆粒包含選自牛皰疹病毒1(BHV-1)、
牛副流感3型病毒(PI₃)、牛呼吸道合胞病毒(BRSV)和牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)的一種或多
種病毒。
5.權(quán)利要求2-4中任一項(xiàng)的方法，其中所述多個(gè)減毒活病毒顆粒包含牛病毒性腹瀉病
毒1a型(BVDV-1a)、牛病毒性腹瀉病毒1b型(BVDV-1b)和牛病毒性腹瀉病毒2型(BVDV-2)中
的一種或多種。
6.權(quán)利要求2-4中任一項(xiàng)的方法，其中標(biāo)記的檢測(cè)探針還包含非熒光猝滅劑或小溝結(jié)
合劑。
7.權(quán)利要求2-4中任一項(xiàng)的方法，其中檢測(cè)探針用6-羧基-熒光素進(jìn)行熒光標(biāo)記。
8.權(quán)利要求1的組合物在檢測(cè)獲自哺乳動(dòng)物疫苗的多核苷酸群中減毒的BVDV-1b-特異
性多核苷酸中的用途。
9.權(quán)利要求8的用途，其中所述用途用于自包含在多價(jià)牛船運(yùn)熱疫苗內(nèi)的多個(gè)減毒活
病毒顆粒中檢測(cè)BVDV-1b特異性多核苷酸。
10.權(quán)利要求1的組合物在制備試劑盒中的用途，所述試劑盒用于檢測(cè)多個(gè)減毒活病毒
顆粒內(nèi)如若存在的BVDV-1b病毒特異性核酸。