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塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列及其擴(kuò)增引物

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2022-01-29
  • 技術(shù)成熟度:已有樣品
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào) CN201810032082.6 
  • 技術(shù)(專利)名稱 塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列及其擴(kuò)增引物 
  • 項(xiàng)目單位 金宇保靈生物藥品有限公司
  • 發(fā)明人 陳君彥,王云凌,王艷杰,張宸,劉建奇,武瑾賢,杜宇榮,謝雪岑,王秀明,魏學(xué)峰,劉國英,關(guān)平原,陳九連,范秀麗,張燕紅,張貴剛 
  • 行業(yè)類別 藥品-化學(xué)藥品
  • 技術(shù)成熟度 已有樣品
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 許韋淑
  • 發(fā)布時(shí)間 2022-01-29  
  • 01

    項(xiàng)目簡介

    本發(fā)明公開了塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列及其擴(kuò)增引物。本發(fā)明先用一步RT?PCR方法擴(kuò)增出SVV/CH/ZZ/2016株的7個(gè)核苷酸序列片段(S1、S2、S3、S4、S5、S6和S7),然后對(duì)7個(gè)核苷酸序列片段進(jìn)行克隆測序,再將7個(gè)核苷酸序列片段的DNA序列依次進(jìn)行拼接、編輯及校正,最終得到塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列。本發(fā)明獲得的塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016全基因組序列有利于塞尼卡谷病毒致病機(jī)制、分子流行病學(xué)、反向遺傳學(xué)等的進(jìn)一步研究,從而對(duì)塞尼卡谷病毒的診斷試劑開發(fā)、疫苗研制等奠定重要的數(shù)據(jù)支持和理論基礎(chǔ)。
    展開
  • 02

    說明書

    1.塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列,其核苷酸序列如序列表中SEQ IDNo:1所示。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列,其特征在于:塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的開放閱讀框的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No:1自5’端第671bp-7213bp所示。3.一種獲得權(quán)利要求1所述塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016全基因組序列的方法,包括以下步驟:1)提取塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016 CGMCC 14886的總RNA;2)以RNA為模板,在上述引物組合的引導(dǎo)下,用一步RT-PCR方法擴(kuò)增塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016全基因組的7個(gè)核苷酸序列片段:S1,長度為1195bp、S2,長度為1581bp、S3,長度為1386bp、S4,長度為1235bp、S5,長度為1698bp、S6,長度為1075bp和S7,長度為876bp;3)將7個(gè)目的核苷酸序列片段回收、連接、轉(zhuǎn)化,挑取陽性單克隆菌測序;4)用生物信息學(xué)DNAStar軟件依次將步驟3)中得到的7個(gè)核苷酸序列片段的DNA序列的重疊部分進(jìn)行拼接、編輯及校正,得到塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于:所述步驟2)中的一步RT-PCR的50μL反應(yīng)體系包括:總RNA2μL、2×One Step RT-PCR BufferⅢ25μL、5U/μL的TaKaRa Ex Taq HS1μL、PrimeScript RT enzyme MixⅡ1μL、20μM的上游引物1μL、20μM的下游引物1μL、無RNA酶水19μL。5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法,其特征在于:所述步驟2)中的一步RT-PCR反應(yīng)程序?yàn)椋合?2℃反轉(zhuǎn)錄30min,再95℃預(yù)變性3min;然后94℃變性10s、50℃-60℃退火30s-60s、72℃延伸30s-120s,共35個(gè)循環(huán);最后72℃延伸10min。
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專利技術(shù)附圖

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