1.一種DON毒素的制備純化方法，是利用禾谷鐮刀菌生產DON毒素，其特征在
于：生產中使用的種子培養基和發酵培養基均為液體培養基，其中，種子培養基由下
列組分按照體積百分比混合：蔗糖1％，硝酸銨0.2％，硫酸鎂0.05％，硫酸鐵0.02％，
磷酸二氫鉀0.2％，蛋白胨0.4％，酵母浸膏0.2％，余量為水；所述的發酵培養基是
由下列組分按照體積百分比混合：硝酸銨0.1％，磷酸二氫鉀0.3％，硫酸鎂0.05％，氯
化鈉0.4％，蔗糖2％，甘油1％，硫酸鋅0.002％，余量為水；具體制備純化方法是：
a)將谷鐮刀菌經活化，接種于種子培養基中，25～28℃，搖床黑暗培養3天，獲
得種子液；
b)將種子液按5％的接種量接種于發酵培養基中，25～28℃，搖瓶或發酵罐黑暗培
養15～20天，獲得發酵培養液；
c)將發酵培養液離心后取上清，用乙酸乙酯萃取，將萃取所得的乙酸乙酯濃縮，
得DON毒素的粗提取液；
d)將DON毒素粗提取液旋轉蒸干后，用環己烷與乙酸乙酯混合溶液溶解，過
60-100目的柱層析硅膠柱，依次分別用不同配比的環己烷與乙酸乙酯混合洗脫液洗脫，
用TLC方法檢測每管洗脫液中含有DON毒素的情況；
e)選擇含有DON毒素的幾管洗脫液旋轉濃縮后，再過60-100目的柱層析硅膠柱，
依次分別用不同配比的環己烷與乙酸乙酯混合洗脫液洗脫，用TLC方法檢測每管洗脫
液中含有DON毒素的情況；
f)選擇只含有DON毒素的幾管進行合并后旋轉蒸干，溶于少量的甲醇中，4℃條
件下形成第一次結晶；
g)把第一次結晶重新溶解于甲醇中，4℃條件下進行二次結晶，獲得純化的DON
毒素；
在d步驟中，所述的環己烷與乙酸乙酯混合溶液中，環己烷與乙酸乙酯的體積比
為5∶1，所述的不同配比的環己烷與乙酸乙酯混合洗脫液是指：環己烷與乙酸乙酯的體
積比分別為5∶1、8∶3、5∶3、1∶1、3∶5和1∶5；在e步驟中，所述的不同配比的環己烷與
乙酸乙酯混合洗脫液是指：環己烷與乙酸乙酯的體積比分別為8∶3、5∶3、1∶1、3∶5和
1∶5；在d步驟和e步驟中，環己烷與乙酸乙酯混合洗脫液的使用順序均為：環己烷的
比例由大到小逐級遞減。
2.根據權利要求1所述的DON毒素結晶的制備純化方法，其特征在于：d步驟和
e步驟中所述的用TLC方法檢測每管洗脫液中含有DON毒素的情況是指：在收集不
同比例洗脫液的樣品后，把每管樣品進行旋轉濃縮，再用TLC方法檢測每管洗脫液中
含有DON毒素的情況。
展開
