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一種檢測三聚氰胺的方法及其專用酶聯免疫試劑盒

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-24
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200810227894.2 
  • 技術(專利)名稱 一種檢測三聚氰胺的方法及其專用酶聯免疫試劑盒 
  • 項目單位 北京望爾生物技術有限公司
  • 發明人 何方洋,萬宇平,馮才偉,趙正苗,馮才茂,汪善良 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 吳俊燦
  • 發布時間 2022-01-24  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種檢測三聚氰胺的方法及其專用酶聯免疫試劑盒。本發明所提供的檢測三聚氰胺的酶聯免疫試劑盒,包括半抗原和三聚氰胺的特異性抗體;所述特異性抗體為所述三聚氰胺的多克隆抗體或單克隆抗體。本試劑盒中采用高特異性的三聚氰胺單克隆抗體,保證了檢測結果的可靠性,實驗結果表明,本試劑盒具有特異性高、靈敏度高、精確度高、準確度高等特點;本試劑盒的主要試劑都采用工作液形式,使用方便,成本低廉。用本發明試劑盒檢測三聚氰胺的方法,操作簡便,對樣品的前處理要求低,能同時快速檢測大批量樣品。因此,利用本發明酶聯免疫試劑盒進行檢測的方法,能夠進行現場監控且適合大量樣品的定性和定量篩查。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種檢測三聚氰胺的酶聯免疫試劑盒,包括半抗原和三聚氰胺的特異性抗
    體;所述特異性抗體為所述三聚氰胺的單克隆抗體;所述半抗原的結構式如下:

    所述單克隆抗體是由保藏號為CGMCC?No.2716的對三聚氰胺藥物單克隆雜
    交瘤細胞株C-3-4分泌產生的抗體。
    2.根據權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:所述半抗原和三聚氰胺的特
    異性抗體以下述任一種形式存在:
    1)將所述半抗原與載體蛋白進行偶聯,得到半抗原與載體蛋白的偶聯物,將
    其作為包被原,所述特異性抗體進行酶標記后作為酶標記物;
    2)所述特異性抗體為包被原,所述半抗原進行酶標記后作為酶標記物。
    3.根據權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:所述試劑盒還包括抗抗體;
    所述抗抗體為羊抗鼠抗抗體;
    所述半抗原和抗抗體以下述任一種形式存在:
    1)將所述半抗原與載體蛋白進行偶聯,得到半抗原與載體蛋白的偶聯物,將
    其作為包被原,所述抗抗體進行酶標記后作為酶標記物;
    2)所述抗抗體為包被原,所述半抗原進行酶標記后作為酶標記物。
    4.根據權利要求1-3中任一所述的試劑盒,其特征在于:所述試劑盒還包括三
    聚氰胺標準品溶液、顯色液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液;
    所述濃縮洗滌液為pH值為7.8-8.5、含有在所述濃縮洗滌液中的質量終濃度為
    0.02-0.05%疊氮化鈉、在所述濃縮洗滌液中的質量終濃度為1.0-2.0%吐溫-20、
    0.1-0.3mol/L的磷酸鹽緩沖液;所述濃縮復溶液為含有在所述濃縮復溶液中的質量
    終濃度為5-10%的DMSO、pH為6.5-6.7、0.1-0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液。
    5.根據權利要求2或3所述的試劑盒,其特征在于:所述酶標記中所用的標
    記酶為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酯酶;當標記酶為辣根過氧化物酶時,所述顯色
    液由顯色液A液和顯色液B液組成,顯色液A液為過氧化氫或過氧化脲,顯色液
    B液為鄰苯二胺或四甲基聯苯胺,終止液為1-2mol/L硫酸或鹽酸溶液;當標記酶為
    堿性磷酸酯酶時,顯色劑為硝基磷酸鹽緩沖液,終止液為1-2mol/L氫氧化鈉溶液。
    6.根據權利要求4所述的試劑盒,其特征在于:所述濃縮洗滌液為pH值為8.2、
    含有在所述濃縮洗滌液中的質量終濃度為0.03%的疊氮化鈉、在所述濃縮洗滌液中
    的質量終濃度為2.0%的吐溫-20、0.2mol/L磷酸鹽緩沖液;所述濃縮復溶液為含有在
    所述濃縮復溶液中的質量終濃度為8%的DMSO、pH為6.6、0.2mol/L磷酸鹽緩沖液。
    7.根據權利要求5所述的試劑盒,其特征在于:所述底物顯色液A液為過氧化
    脲,所述底物顯色液B液為四甲基聯苯胺;所述終止液為2mol/L的鹽酸。
    8.一種檢測三聚氰胺的方法,包括以下步驟:
    1)樣品前處理
    當所述樣品為牛奶樣品時,所述樣品前處理方法為:將濃縮復溶液與牛奶混勻,
    其中所述牛奶與所述濃縮復溶液的體積比為1∶8-10,取所述混勻后的樣品用于分
    析;
    當所述樣品為奶粉樣品時,所述樣品前處理方法為:用醋酸緩沖液超聲溶解奶
    粉,其中所述醋酸緩沖液與所述奶粉的配比為4-6ml∶0.5-1.5g,離心取上清液,將
    所述上清液以1∶8-10的體積比與濃縮復溶液混勻,取樣用于分析;
    當所述樣品為飼料時,所述樣品前處理方法為:將乙腈與飼料混勻,其中所述
    乙腈與所述飼料的配比為8-12ml∶0.5-1.5g,然后超聲提取8-15min,離心取上清液;
    再將所述上清液吹干,加入正己烷,混勻,再加入濃縮復溶液,其中所述上清液、
    所述正己烷與所述濃縮復溶液的體積比為1∶1∶1,離心取下層水相;將所述下層
    水相與所述濃縮復溶液以1∶8-10的體積比混勻,取樣用于分析;
    2)利用權利要求1-6中任一所述的酶聯免疫試劑盒檢測1)中所得到的樣品。
    9.由保藏號為CGMCC?No.2716的對三聚氰胺藥物單克隆雜交瘤細胞株C-3-4
    分泌產生的三聚氰胺的單克隆抗體。
    10.保藏號為CGMCC?No.2716的對三聚氰胺藥物單克隆雜交瘤細胞株C-3-4。
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專利技術附圖

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