本發(fā)明公開了16種型別HPV病毒的檢測引物、探針及試劑盒，該引物及探針可以快速、準(zhǔn)確、簡便地對HPV病毒相關(guān)性疾病進(jìn)行篩查，不與其他病毒發(fā)生交叉反應(yīng)，能同時(shí)檢測出常見的HPV高危型和低危型，共2種HPV低危型和14種HPV高危型，且HPV高危型覆蓋范圍廣，比目前市場上的試劑盒檢測更為準(zhǔn)確和全面。本發(fā)明的試劑盒還包括陰性、陽性和弱陽性質(zhì)控品，進(jìn)一步增加了檢測的準(zhǔn)確性。

1.一種檢測16種型別HPV病毒的試劑盒，其特征在于，包括16種型別HPV病毒的檢測引
物和探針，還包括PCR反應(yīng)液，陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品；其中，
陰性質(zhì)控品為滅菌生理鹽水；
陽性質(zhì)控品和弱陽性質(zhì)控品是以提純的16種型別HPV病毒基因組為模板，由16種型別
相應(yīng)的基因擴(kuò)增引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，16種擴(kuò)增產(chǎn)物連接，經(jīng)基因測序確認(rèn)正確后包裝所得的
假病毒；
探針序列的5’端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)，3’端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)，各型別檢測引物及
探針序列如下：
HPV6型：
上游引物HPV6-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:1，
下游引物HPV6-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:2，
Taqman熒光探針HPV6-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:3；
HPV11型：
上游引物HPV11-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:4，
下游引物HPV11-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:5，
Taqman熒光探針HPV11-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:6；
HPV16型：
上游引物HPV16-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:7，
下游引物HPV16-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:8，
Taqman熒光探針HPV16-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:9；
HPV18型：
上游引物HPV18-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:10，
下游引物HPV18-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:11，
Taqman熒光探針HPV18-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:12；
HPV31型：
上游引物HPV31-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:13，
下游引物HPV31-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:14，
Taqman熒光探針HPV31-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:15；
HPV33型：
上游引物HPV33-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:16，
下游引物HPV33-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:17，
Taqman熒光探針HPV33-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:18；
HPV35型：
上游引物HPV35-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:19，
下游引物HPV35-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:20，
Taqman熒光探針HPV35-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:21；
HPV39型：
上游引物HPV39-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:22，
下游引物HPV39-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:23，
Taqman熒光探針HPV39-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:24；
HPV45型：
上游引物HPV45-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:25，
下游引物HPV45-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:26，
Taqman熒光探針HPV45-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:27；
HPV51型：
上游引物HPV51-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:28，
下游引物HPV51-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:29，
Taqman熒光探針HPV51-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:30；
HPV52型：
上游引物HPV52-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:31，
下游引物HPV52-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:32，
Taqman熒光探針HPV52-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:33；
HPV56型：
上游引物HPV56-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:34，
下游引物HPV56-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:35，
Taqman熒光探針HPV56-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:36；
HPV58型：
上游引物HPV58-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:37，
下游引物HPV58-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:38，
Taqman熒光探針HPV58-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:39；
HPV59型：
上游引物HPV59-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:40，
下游引物HPV59-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:41，
Taqman熒光探針HPV59-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:42；
HPV66型：
上游引物HPV66-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:43，
下游引物HPV66-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:44，
Taqman熒光探針HPV66-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:45；
HPV68型:
上游引物HPV68-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:46，
下游引物HPV68-R：核苷酸序列如SEQ ID NO:47，
Taqman熒光探針HPV68-P：核苷酸序列如SEQ ID NO:48；
所述熒光報(bào)告基團(tuán)選自6-羧基熒光素、六氯-6-甲基熒光素、VIC熒光染料、四氯-6-羧
基熒光素、羧基-X-羅丹明、6-羧基四甲基羅丹明、磺酰羅丹明、6-羧基-4’,5’-二氯-2’,7’-
二甲氧基熒光素琥珀酰亞胺酯、花菁3、花菁3.5、花菁5和花菁5.5中的至少一種；所述熒光
淬滅基團(tuán)選自6-羧基四甲基羅丹明、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、黑洞淬滅劑1、黑
洞淬滅劑2或黑洞淬滅劑3中的至少一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測16種型別HPV病毒的試劑盒，其特征在于，盒內(nèi)試劑包括
獨(dú)立包裝的HPV裂解液、PCR反應(yīng)液、陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品、弱陽性質(zhì)控品和以下8組引物
探針混合液：
A組：由HPV 6型和HPV 11型的上游引物、下游引物和Taqman熒光探針溶于無菌超純水
組成；
B組：由HPV 16型和HPV 18型的上游引物、下游引物和Taqman熒光探針溶于無菌超純水
組成；
C組：由HPV 31型和HPV 52型的上游引物、下游引物和Taqman熒光探針溶于無菌超純水
組成；
D組：由HPV 33型和HPV45型的上游引物、下游引物和Taqman熒光探針溶于無菌超純水
組成；
E組：由HPV 35型和HPV 51型的上游引物、下游引物和Taqman熒光探針溶于無菌超純水
組成；
F組：由HPV 39型和HPV 59型的上游引物、下游引物和Taqman熒光探針溶于無菌超純水
組成；
G組：由HPV 56型和HPV 68型的上游引物、下游引物和Taqman熒光探針溶于無菌超純水
組成；
H組：由HPV56型和HPV 68型的上游引物、下游引物和Taqman熒光探針溶于無菌超純水
組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測16種型別HPV病毒的試劑盒，其特征在于，HPV6型、HPV16
型、HPV31型、HPV35型、HPV39型、HPV45型、HPV58型和HPV68型的Taqman熒光探針核苷酸序列
5’端標(biāo)記6-FAM，3’端標(biāo)記BHQ1；
HPV11型、HPV18型、HPV33型、HPV51型、HPV52型、HPV56型、HPV59型和HPV66型的Taqman
熒光探針核苷酸序列5’端標(biāo)記HEX；3’端標(biāo)記BHQ1。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測16種型別HPV病毒的試劑盒，其特征在于，陽性質(zhì)控品中
假病毒的濃度為1×10⁵拷貝/mL，弱陽性質(zhì)控品中假病毒的濃度為1×10³拷貝/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測16種型別HPV病毒的試劑盒，其特征在于，各組引物探針
混合液中，上游引物、下游引物和探針的濃度均為10μM，上游引物用量0.75μL，下游引物用
量0.75μL，探針用量0.5μL，最后用無菌超純水補(bǔ)足至5.5μL。