本發(fā)明公開了一種檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒及其檢測方法和應(yīng)用，屬于體外診斷檢測技術(shù)領(lǐng)域。該試劑盒包括以下組分：1)磁性微球體系：包括直接連接或間接連接抗HBsAg抗體1的磁性微球；2)第一標(biāo)記物體系：包括直接連接或間接連接第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物的抗HBsAg抗體2；3)第二標(biāo)記物體系：包括直接連接或間接連接第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物的抗HBsAg抗體2，或者包括直接連接或間接連接第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物的抗HBsAg抗體3。采用本發(fā)明的試劑盒和檢測方法來檢測乙肝病毒表面抗原，具有靈敏度高和不會產(chǎn)生HOOK效應(yīng)的優(yōu)點。

1.一種檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒，其特征在于，包括以下組分：
1)磁性微球體系：包括有直接連接或間接連接抗HBsAg抗體1的磁性微球；
2)第一標(biāo)記物體系：包括有直接連接或間接連接第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物的
抗HBsAg抗體2；
3)第二標(biāo)記物體系：包括有直接連接或間接連接第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物的
抗HBsAg抗體2，或者包括有直接連接或間接連接第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物的抗
HBsAg抗體3；
所述標(biāo)記示蹤物為發(fā)光標(biāo)記物，選自：魯米諾及其衍生物，異魯米諾及其衍生物；
所述抗HBsAg抗體1、抗HBsAg抗體2和抗HBsAg抗體3的抗體位點互不相同；
所述抗HBsAg抗體1為單克隆抗體，所述抗HBsAg抗體2為多克隆抗體；
所述第一標(biāo)記物體系和第二標(biāo)記物體系中所用的標(biāo)記示蹤物相同。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒，其特征在于，所述第一標(biāo)記
物體系中所用的抗HBsAg抗體，和第二標(biāo)記物體系中所用的抗HBsAg抗體相同。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒，其特征在于，所述1)磁性微
球體系中，所述間接連接抗HBsAg抗體1的磁性微球由包被鏈霉親和素的磁性微球，和標(biāo)記
生物素的抗HBsAg抗體1組成；或所述間接連接抗HBsAg抗體1的磁性微球由包被抗FITC抗體
的磁性微球，和標(biāo)記FITC的抗HBsAg抗體1組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒，其特征在于，所述2)第一標(biāo)
記物體系中：所述間接連接第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物的抗HBsAg抗體2由標(biāo)記生物
素的抗HBsAg抗體2，和標(biāo)記鏈霉親和素的第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物組成；或所述
間接連接第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物的抗HBsAg抗體2由標(biāo)記FITC的抗HBsAg抗體2，
和標(biāo)記抗FITC抗體的第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒，其特征在于，所述3)第二標(biāo)
記物體系中：所述間接連接第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物的抗HBsAg抗體2由標(biāo)記生物
素的抗HBsAg抗體2，和標(biāo)記鏈霉親和素的第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物組成；或所述
間接連接第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物的抗HBsAg抗體2由標(biāo)記FITC的抗HBsAg抗體2，
和標(biāo)記抗FITC抗體的第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物組成；
所述間接連接第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物的抗HBsAg抗體3由標(biāo)記生物素的抗
HBsAg抗體3，和標(biāo)記鏈霉親和素的第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物組成；或所述間接連
接第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物的抗HBsAg抗體3由標(biāo)記FITC的抗HBsAg抗體3，和標(biāo)記
抗FITC抗體的第一標(biāo)記示蹤物或第二標(biāo)記示蹤物組成。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測乙肝病毒表面抗原的試劑盒，其特征在于，按照以下步驟
使用：
1)一次加樣：將待測樣本與第一標(biāo)記物體系和磁性微球體系混合，溫育，形成復(fù)合物；
2)清洗：外加磁場將上述反應(yīng)產(chǎn)物沉淀，去除上清液，并以緩沖液清洗；
3)二次加樣：將第二標(biāo)記物體系加入上述沉淀中，混合均勻，溫育，使上述沉淀與第二
標(biāo)記物體系反應(yīng)，形成雙抗夾心復(fù)合物；
4)檢測：外加磁場將上述雙抗夾心復(fù)合物沉淀，去除上清液，清洗后，加入發(fā)光底物，檢
測發(fā)出的相對光強(qiáng)度，計算得到HBsAg的含量。