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用于檢測志賀氏菌的方法和試劑盒

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-06-24
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310045643.3 
  • 技術(專利)名稱 用于檢測志賀氏菌的方法和試劑盒 
  • 項目單位 江西中德生物工程有限公司
  • 發明人 劉道峰,賴衛華,鄧省亮 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 錢川哲
  • 發布時間 2021-06-24  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供了一種用于檢測志賀氏菌的試劑盒,該試劑盒包括:免疫磁珠,所述免疫磁珠用于對樣品中的志賀氏菌進行富集;以及檢測試劑條,所述檢測試劑條為志賀氏菌雙抗夾心檢測卡,用于對樣品中的志賀氏菌進行檢測。由此,可以通過采用免疫磁珠進行富集,能夠有效地縮短致病菌檢測中最為耗時的增菌步驟。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種用于檢測志賀氏菌的試劑盒,其特征在于,包括:
    免疫磁珠,所述免疫磁珠用于對樣品中的志賀氏菌進行富集;以及
    檢測試劑條,所述檢測試劑條為志賀氏菌雙抗夾心檢測卡,用于對樣品中的志賀氏菌
    進行檢測,
    其中,
    所述免疫磁珠為表面羧基化磁珠,
    所述免疫磁珠為納米或亞微米磁珠,所述納米或亞微米磁珠上偶聯有抗志賀氏菌多克
    隆或單克隆抗體,
    所述磁珠與抗志賀氏菌抗體為親合單點偶聯,
    所述磁珠為鏈霉親和素化磁珠,所述抗志賀氏菌抗體為生物素化抗志賀氏菌抗體,
    生物素化抗志賀氏菌抗體為長鏈生物素與抗志賀氏菌抗體通過共價偶聯所得,其中,
    生物素與抗志賀氏菌抗體的摩爾比低于1:1。
    2.根據權利要求1所述的試劑盒,其特征在于,抗志賀氏菌多克隆或單克隆抗體對于
    痢疾志賀氏菌(S.dysenteriae)、福氏志賀氏菌(S.flexneri)、鮑氏志賀氏菌(S.boydii)和宋內氏志
    賀氏菌(S.sonnei)的至少一種志賀氏菌血清型呈陽性反應,對新生霉素抗性細菌呈陰性反應。
    3.一種利用權利要求1或2所述的試劑盒檢測志賀氏菌的方法,其特征在于,包括以
    下步驟:
    利用所述免疫磁珠對待檢測的樣品中的志賀氏菌進行富集,以便獲得志賀氏菌經過富
    集的樣品;以及
    利用所述檢測試劑條對所述志賀氏菌進行檢測。
    4.根據權利要求3所述的方法,其特征在于,在進行富集之前,預先對所述樣品進行
    增菌處理。
    5.根據權利要求4所述的方法,其特征在于,包括以下步驟:
    1)樣品預增菌:以無菌操作取檢樣25g或25mL,加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌
    肉湯-新生霉素的均質杯,用旋轉刀片式均質器以8000r/min~10000r/min均質;或加入
    裝有225mL志賀氏菌增菌肉湯-新生霉素的均質袋中,用拍擊式均質器連續均質
    1~2min,并將均質后的樣品于40℃±1℃,厭氧培養10h;
    2)使用權利要求1或2所述試劑盒,借助所述免疫磁珠進行磁分離富集:取1mL預
    增菌菌液加入到2mL離心管,向其中加入50μL濃度為2mg/mL的所述免疫磁珠,室
    溫下在旋轉混合儀上10rpm反應30min,后取下,磁力架分離,棄去上清,最后用100μL
    pH=7.2的PBS重懸磁珠;
    3)檢測前滅活與處理:將所得到的磁珠重懸液于90℃水浴上水浴5min,所得液體于
    磁場中進行磁分離,取清液為樣本待檢液;
    4)將步驟3)所得待檢液取80μL滴加于所述志賀氏菌雙抗夾心檢測卡,5~10min判讀
    結果。
    6.根據權利要求4所述的方法,其特征在于,包括以下步驟:
    1)樣品預增菌:以無菌操作取液體樣本25mL,加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌肉
    湯-新生霉素的均質杯,用旋轉刀片式均質器以8000r/min~10000r/min均質;或加入裝
    有225mL志賀氏菌增菌肉湯-新生霉素的均質袋中,用拍擊式均質器連續均質1~2min,
    并將均質后的樣品于40℃±1℃,厭氧培養10h;
    2)使用權利要求1或2所述試劑盒,借助所述免疫磁珠進行磁分離富集:取1mL預
    增菌菌液加入到2mL離心管,向其中加入50μL濃度為2mg/mL的所述免疫磁珠,室
    溫下在旋轉混合儀上10rpm反應30min,后取下,磁力架分離,棄去上清,最后用100μL
    pH=7.2的PBS重懸磁珠;
    3)檢測前滅活與處理:將所得到的磁珠重懸液于90℃水浴上水浴5min,所得液體于
    磁場中進行磁分離,取清液為樣本待檢液;
    4)將步驟3)所得待檢液取80μL滴加于所述志賀氏菌雙抗夾心檢測卡,5~10min判讀
    結果。
    展開

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