梅毒特異性IgG抗體免疫印跡試劑盒及其制備方法，涉及一種試劑盒。試劑盒設載體板、硝酸纖維膜、梅毒特異性IgG抗體檢測線、對照線，檢測線和對照線依次設在硝酸纖維膜上；在梅毒特異性IgG抗體檢測線處包被梅毒特異性重組抗原，在對照線處包被人IgG抗體；辣根過氧化物酶標記抗人γ鏈抗體。先制備梅毒特異性重組抗原，再硝酸纖維素膜的點樣，然后制備抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體，標記抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體的辣根過氧化物酶后制備免疫印跡試劑盒。可用于全血、血清、血漿及腦脊液等標本中梅毒特異性IgG抗體的檢測。所需標本量極小，不需特殊儀器，且檢測簡便快速，特異性強，靈敏度高，準確可靠，成本低。

1.梅毒特異性IgG抗體免疫印跡試劑盒的制備方法，其特征在于所述梅毒特異性IgG抗
體免疫印跡試劑盒設有載體板、硝酸纖維膜、梅毒特異性IgG抗體檢測線、對照線，梅毒特
異性IgG抗體檢測線和對照線依次設在硝酸纖維膜上；在梅毒特異性IgG抗體檢測線處包被
梅毒特異性重組抗原，在對照線處包被人IgG抗體；辣根過氧化物酶標記抗人γ鏈抗體；
所述梅毒特異性重組抗原為TPN15、TPN17、TPN37、TPN44.5、TPN47；
所述制備方法，包括以下步驟：
1）制備梅毒特異性重組抗原
采用基因克隆技術，PCR擴增編碼梅毒螺旋體抗原的DNA，并插入大腸桿菌中使其表達，
得梅毒特異性重組抗原；所述梅毒特異性重組抗原為TPN15、TPN17、TPN37、TPN44.5、
TPN47；
2）硝酸纖維素膜的點樣
在硝酸纖維素膜IgG檢測線上包被梅毒特異性重組抗原，在對照線處包被人IgG抗體，
晾干；所述梅毒特異性重組抗原為TPN15、TPN17、TPN37、TPN44.5、TPN47；所述梅毒特
異性重組抗原和人IgG抗體的濃度為1～4mg/mL；點樣量為1μL/cm；
3）制備抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體
以人IgG特異性片段γ鏈為抗原免疫Balb/c小鼠，通過雜交瘤技術，篩選獲得穩定分泌
抗人IgG單克隆抗體的雜交瘤細胞株；
4）抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體的辣根過氧化物酶標記
采用過碘酸鈉法進行辣根過氧化物酶標記；所述辣根過氧化物酶的底物由0.03%（W/V）
的過氧化氫和0.07%（W/V）的二氨基聯苯胺組成；
5）制備免疫印跡試劑盒
將硝酸纖維膜粘貼在載體板上表面，梅毒特異性IgG抗體檢測線和對照線依次設在硝酸
纖維膜上，在梅毒特異性IgG抗體檢測線處包被梅毒特異性重組抗原，在對照線處包被人IgG
抗體，用切條機切成條狀，與酶標記的抗人γ鏈單克隆抗體及其底物共同組裝成梅毒特異性
IgG抗體免疫印跡試劑盒；所述梅毒特異性重組抗原為TPN15、TPN17、TPN37、TPN44.5、
TPN47。
2.如權利要求1所述的梅毒特異性IgG抗體免疫印跡試劑盒的制備方法，其特征在于所
述載體板采用PVC板。
3.如權利要求1所述的梅毒特異性IgG抗體免疫印跡試劑盒的制備方法，其特征在于在
步驟3）中，采用ELISA的方法鑒定McAb效價在1∶10⁷以上。