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熒光PCR定性檢測含有花椰菜花葉病毒35S啟動子轉基因作物探針序列及試劑盒

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-07-26
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN02131298.2 
  • 技術(專利)名稱 熒光PCR定性檢測含有花椰菜花葉病毒35S啟動子轉基因作物探針序列及試劑盒 
  • 項目單位 深圳市匹基生物工程股份有限公司
  • 發明人 朱文斯,朱水芳,黃茜華 
  • 行業類別 藥品-輔料
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 趙佳沐
  • 發布時間 2021-07-26  
  • 01

    項目簡介

    一種熒光PCR定性檢測含有花椰菜花葉病毒35S啟動子轉基因作物探針序列及試劑盒,所述的探針序列包括:序列tgcctctgccgacagtggtcccaa向上游延伸5個堿基、向下游延伸5個堿基的區域內形成的序列。所述的試劑盒組成為:核酸提取試劑;核酸擴增試劑,所述的核酸擴增試劑包括:35sPCR反應液、18s-rRNAPCR反應液、Taq酶(5U/ul)、UNG(1U/ul);對照品等。本試劑盒對于轉入花椰菜花葉病毒35S啟動子的轉基因作物檢測靈敏度可達0.1%,本試劑盒還具有良好的特異性。由于本試劑盒采用了植物內源基因18S-rRNA作為內標,避免了假陰性的產生,由于本方法對PCR產物實行了實時監測,大大節省了檢測時間,節約了人力物力。
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  • 02

    說明書

    1.一種熒光PCR定性檢測含有花椰菜花葉病毒35S啟動子轉基因作物的探針,其特征在于:所述探針為Fam-tgcctctgccgacagtggtcccaa-TAMRA。2.一種根據權利要求1所述的探針做成的試劑盒,其組成為:核酸提取試劑核酸擴增試劑35S?PCR反應液18s-rRNAPCR反應液Taq酶5U/ulUNG??1U/ul純化水對照品35S陽性對照品18s-rRNA陽性對照品用于檢測35S啟動子的探針Fam-tgcctctgccgacagtggtcccaa-TAMRA,用于檢測18s-rRNA的探針Fam-TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT-TAMRA,其中,35S?PCR反應液中用于擴增35S啟動子的上游引物,其序列為:TGCCATCATTGCGATAAAG,擴增35S啟動子的下游引物,其序列為:CCCTTACGTCAGTGGAGAT;其中,18s-rRNAPCR反應液中用于擴增18s-rRNA的上游引物,其序列為:cctgagaaacggctaccat,擴增18s-rRNA的下游引物,其序列為:cgtgtcaggattgggtaat。3.一種根據權利要求2所述的試劑盒,其特征在于:其組成為:組成成份??????????????????????體積CTAB法核酸提取試劑CTAB緩沖液????????????????????40ml×1管CTAB沉淀緩沖液????????????????40ml×1管沉淀溶解液????????????????????24ml×1管核酸擴增試劑35SPCR反應液??????????????????1ml×2管18s-rRNAPCR反應液?????????????1ml×2管Taq酶5U/ul????????????????40ul×1管UNG?1U/ul?????????????????10ul×1管純化水????????????????????100ul×1管對照品35S陽性對照品?????????????30ul×1管18s-rRNA陽性對照品????????30ul×1管試劑盒中各組分配方:35SPCR反應液為:??????????終濃度10x?buffer????????????????1xMgCl2?????????????????????2.5mMdATP、dUTP、dGTP、dCTP????200uM擴增35S啟動子的上游引物???0.2uM擴增35S啟動子的下游引物???0.2uM檢測35S啟動子的探針???????0.1uM水終體積ul??????????????????40ul18s-rRNAPCR反應液:試劑成份??????????????????終濃度10x?buffer????????????????1xMgCl2?????????????????????2.5mMdATP、dUTP、dGTP、dCTP????200uM擴增18s-rRNA上游引物??????0.2uM擴增18s-rRNA下游引物??????0.2uM檢測18s-rRNA的探針????????0.1uM水終體積ul??????????????????40ulCTAB法核酸提取試劑配方為:CTAB緩沖液????????????????20gCTAB/L,1.4MNaCI,??????????????????????????0.1M?Tris/HCl,20mM?EDTA?pH=8.0CTAB沉淀緩沖液????????????5gCTAB/L,0.04M?NaCI沉淀溶解液????????????????1.2MNaCl。
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