本發明公開了一種檢測細胞應激反應中蛋白表達的微陣列芯片、制備方法、試劑盒及檢測方法。本發明的微陣列芯片的組成上，選用了7類應激反應標志物，可以明確不同刺激條件下細胞應激反應應對的內部細胞蛋白表達的變化，實現快速篩選與評價；本發明選用醛基化修飾的玻片作為固體載體，使特異性抗體結合更穩定，活性更高；能夠有效排除光譜芯片測試的假陽性和假陰性，交叉反應測試顯示芯片的指標測試靈敏度高、特異性好；本發明的微陣列芯片制備方法簡便，檢測快速，整個流程只需2d完成；靈敏度高；特異性好，并且制作成本較低，有廣闊的產業化前景。

1.一種檢測細胞應激反應中蛋白表達的微陣列芯片，其包括固體載體及列陣式固定在
固體載體上的應激反應標志物的獨立地特異性抗體；
所述的應激反應標志物為下述多種標志蛋白，每種標志蛋白中又含有多個獨立地標志
蛋白，其中：
細胞增殖標志蛋白為PCNA、Ki67、CyclinD1；
細胞凋亡標志蛋白為PRAP、Caspase3、Caspase9、Caspase8、Caspase12、Bcl-2、Bad；
細胞自噬標志蛋白為LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62、Atg3、Atg5、Atg7、Atg12；
細胞遷移標志蛋白為FAK、cofilin、profilin、CDC42、α-Tubulin；
蛋白質翻譯標志蛋白為eIF2B、eIF4EBP1、p70S6K、mTOR、eIF4E、S6RP；
細胞干性標志蛋白為Oct3/4、SSEA-3/4/1、SOX2、Nanog、CD34、ABCG2、STRO-1、Nestin、
PSA-NCAM、Sca-1、CD44、CD166、CD133；
細胞應激標志蛋白為HIF1、HIF2、P53、ATF4、HSP70、HSP90、ROS、Nrf2、ATF6；
所述的固體載體為醛基化修飾的玻片。
2.根據權利要求1所述的微陣列芯片，其特征在于：微陣列芯片的固體載體上還列陣式
固定有陽性對照蛋白的特異性抗體和/或陰性對照蛋白的特異性抗體。
3.一種制備如權利要求1～2任一項所述的檢測細胞應激反應中蛋白表達的微陣列芯
片的方法，包括如下步驟：
按點間距離為300～400μm，點樣量為350～450pL，將濃度為300～500μg/mL的特異性抗
體溶液以列陣式點樣于醛基化修飾的玻片上，室溫干燥后，固定，封閉，孵育后，獲得微陣列
芯片。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：醛基化修飾的方法是：將清洗干凈的玻片
用含4.0～6.0％V/V氨基甲氧基硅烷的乙醇溶液處理20～40min，干燥，再用含1.5～3.5％
V/V戊二醛的PBS溶液處理50～70min，干燥，獲得醛基化修飾的玻片。
5.一種檢測細胞應激反應中蛋白表達的微陣列芯片的試劑盒，其特征在于：含有權利
要求1～2任一項所述的微陣列芯片。
6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：還含有細胞裂解液、組織裂解液、稀釋
液、洗液、酶標二抗、發光底物中的一種或多種。
7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于：所述稀釋液為蛋白穩定劑；
和/或洗液為中性緩沖液；
和/或酶標二抗為辣根過氧化物酶標記的二抗；
和/或發光底物為熒光素555。
8.細胞應激反應中蛋白表達的檢測方法，包括如下步驟：將待檢細胞樣品進行裂解，獲
得蛋白裂解液，點樣于權利要求1～2任一項所述的微陣列芯片上，孵育，清洗；再加入酶標
二抗，孵育，清洗；再加入發光底物，孵育，清洗；讀取熒光信號，以陽性對照蛋白為內參，以
內參為標準進行歸一化處理，獲得半定量檢測結果。