本發(fā)明提供一種用于檢測(cè)酶活性的熒光小分子探針及其制備方法和應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。解決現(xiàn)有的檢測(cè)酶活性方法有許多是給出熒光減弱的負(fù)信號(hào)，而導(dǎo)致檢測(cè)的靈敏度低、穩(wěn)定性差的問(wèn)題。該小分子探針為3,4,9,10-四-（4-三甲基胺丁基氧-羰基）-苝，是以苝酐為原料進(jìn)行烷基化反應(yīng)，然后在烷基鏈的末端離子化，使其帶上正電荷得到的，該小分子探針可用于檢測(cè)酶的活性，將小分子探針和底物分子配置成混合溶液，然后再混合溶液中加入不同濃度的酶，對(duì)酶的活性進(jìn)行熒光檢測(cè)，該小分子探針還可以檢測(cè)酶抑制劑的活性。本發(fā)明的檢測(cè)方法利用小分子探針可控自組裝帶來(lái)的熒光增強(qiáng)的信號(hào)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)酶活性及酶抑制劑活性快速、靈敏的檢測(cè)。

1.一種用于檢測(cè)酶活性的小分子探針，其特征在于，該小分子探針為3,4,9,10-四-（4-三甲基胺丁基氧-羰基）-苝，其結(jié)構(gòu)式為：?2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于檢測(cè)酶活性的小分子探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：?步驟一：將苝酐溶于堿溶液中，過(guò)濾，濾液調(diào)節(jié)pH值至8～9，加入四正辛基溴化胺和1，4-二溴丁烷，在100℃～120℃回流反應(yīng)1～3h，經(jīng)萃取、蒸餾和純化，得到化合物3,4,9,10-四-（4-溴丁基-酯基）-苝，所述的苝酐、四正辛基溴化胺和1，4-二溴丁烷的摩爾比為1：0.1：10；?步驟二：將步驟一的得到的化合物3,4,9,10-四-（4-溴丁基-酯基）-苝溶于溶于四氫呋喃與水的混合液中，在混合溶液中加入三甲胺，在60℃～70℃回流48～96h，經(jīng)蒸餾、萃取和干燥后得到3,4,9,10-四-（4-三甲基胺丁基氧-羰基）-苝，所述的3,4,9,10-四-（4-溴丁基-酯基）-苝與三甲胺的摩爾比為1：20。?3.權(quán)利要求1所述的一種用于檢測(cè)酶活性的小分子探針的應(yīng)用，其特征在于，該小分子探針可用于檢測(cè)酶的活性，其檢測(cè)方法為：將小分子探針和底物分子配置成混合溶液，在混合溶液中加入不同濃度的酶，對(duì)酶的活性進(jìn)行熒光檢測(cè)。?4.權(quán)利要求3所述的一種用于檢測(cè)酶活性的小分子探針的應(yīng)用，其特征在于，所述的底物分子為ATP、多肽或核酸分子。?5.權(quán)利要求3所述的一種用于檢測(cè)酶活性的小分子探針的應(yīng)用，其特征在于，所述的酶為磷酸酶、蛋白酶或核酸酶。?6.權(quán)利要求3所述的一種用于檢測(cè)酶活性的小分子探針的應(yīng)用，其特征在于，所述的方法中，檢測(cè)反應(yīng)體系為：400μL總體系，濃度為5mMpH值為8.2的Tris-HAc緩沖溶液，濃度為1-5μM小分子探針，濃度為0.2-200μM底物分子，0-5U/mL的酶，余量為無(wú)菌水。?7.權(quán)利要求3所述的一種用于檢測(cè)酶活性的小分子探針的應(yīng)用，其特征在于，所述的檢測(cè)溫度為25℃。?8.權(quán)利要求3所述的一種用于檢測(cè)酶活性的小分子探針的應(yīng)用，其特征在于，所述的熒光檢測(cè)條件為以442nm熒光激發(fā)，450－650nm熒光檢測(cè)。?9.權(quán)利要求1所述的一種用于檢測(cè)酶活性的小分子探針的應(yīng)用，其特征在于，該小分子探針可用于檢測(cè)酶抑制劑的活性，其檢測(cè)方法為：將小分子探針和底物分子配置成混合溶液，在混合溶液中加入不同濃度的酶抑制劑，再加入酶，對(duì)酶抑制劑的活性進(jìn)行熒光檢測(cè)。?10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種用于檢測(cè)酶活性的小分子探針的應(yīng)用，其特征在于，所述的酶抑制劑為Na₃VO₄、對(duì)甲基苯磺酰氟或焦磷酸鈉。?